| AutorIn | | Name: | DIPL.-ING. Christian Janos Josef Rabel | Beurteilende(r)| Name: | Ao.Univ.Prof. Dipl.-Ing. Dr.nat.techn. Diethard Mattanovich | | Herkunftsbetrieb: | | | Arbeit | | Typ der Arbeit: | Masterarbeit | | Sprache der Arbeit: | Deutsch | | Titel der Arbeit in Originalsprache: | Molekulargenetische Untersuchung der Sulfitbildung in Saccharomyces cerevisiae | | Titel der Arbeit in deutsch: | Molekulargenetische Untersuchung der Sulfitbildung in Saccharomyces cerevisiae | | Titel der Arbeit in englisch: | n.a. | | Publikationsmonat: | 09.1999 | | Seitenanzahl: | | | Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur | | AC-Nummer: | AC02626389 | | Abstract | | Abstract in Deutsch: | Die Hefe Saccharomyces cerevisiae ist in der Lage, über den
Stoffwechselweg der reduktiven Sulfatassimilation Sulfit zu bil-
den. Aufgabenstellung dieser Arbeit war es, die zwei Laborhefe-
stämme L1 und L6, die sich in ihrem Sulfitbildungsvermögen deut-
lich unterscheiden, auf eine möglicherweise unterschiedliche
Transkription der Gene MET3, MET14 und MET16 zu untersuchen.
Zur Lösung dieser Fragestellung wurden mit beiden Stämmen Gär-
versuche durchgeführt. Wesentliche Gärungsparameter wurden be-
stimmt, zur Untersuchung der Transkription wurden Northern Blot
Analysen mit P(32)-ATP markierten DNA-Proben durchgeführt.
Die Analyse der Gärung ergab, daß sich die beiden Stämme nur in
der Sulfitbildung signifikant unterscheiden. Die Hefe L6 bildete
bis zu 40mg/l Sulfit, die Hefe L1 bildete keine nachweisbaren
Mengen. Ein Zusammenhang zwischen der Bildung von Sulfit und
einer unterschiedlichen Transkription der Gene MET3, MET14 und
MET16 konnte nicht gefunden werden. In den Gärversuchen
herrschten aufgrund der hohen Konzentrationen von L-Methionin
reprimierende Bedingungen für die Gene der Sulfatassimilation,
bei beiden Stämmen wurden MET3, MET14 und MET16 nur schwach
transkribiert. Es wird angenommen, daß der Weg der Sulfat-
assimilation nicht oder nur schwach beschritten wird.
Eine weitere Aufgabenstellung dieser Arbeit bestand darin, eine
Methode für den nicht-radioaktiven Nachweis von RNA mit dem DIG-
System zu etablieren. Es wurde versucht, auf Northern Blots das
stark exprimierte Gen Act1 für Actin nachzuweisen. In den durchge-
führten Versuchen konnten spezifische Actin-Banden nur zweimal
nachgewiesen werden. Als Ursache für die schlechte Nachweisbarkeit
wird die kolorimetrische Detektion mit den Substraten NBT/BCIP
angenommen.
| | Abstract in Englisch: | The yeast Saccharomyces cerevisiae is capable of forming sulfite
through the sulfate assimliation pathway. In this M.sc. thesis,
the two strains L1 and L6 of S. cerevisiae have been analysed,
which were known to differ significantly in the concentrations
of sulfite formed during fermentation.The main question was, if
there is a correlation between the transcription of the three
genes MET3, MET14, MET16 out of the sulfate assimilation pathway
and the difference in sulfite formed.
In order to answer these questions, fermentations with both
strains have been carried out in the medium YEPM (10% maltose-
monohydrate). The concentrations of maltose, ethanol, sulfite
and L-methionine have been measured, and comparing Northern Blot
analyses with MET3, MET14 and MET16 have been made.
The strain L6 formed 40mg/l sulfite, whereas L1 did not form
detectable concentrations of this metabolite. No sigificant
differences in the transcription of the genes MET3, MET14, MET16
could be found, the levels of mRNA generally were very low. The
high concentrations of L-methionine indicated that the fermen-
tations were carried out under repressive conditions.
Second task of this M.sc. thesis was to establish a method for
non-radioactive detection of RNA with the DIG-sytem. Northern
Blots with total yeast RNA have been made, it was tried to
detect the strong expressed gene Act1 coding for actine. Summing
up, the detection was not reproducable. Most probable reason for
it is the weakness of the colorimetric detection with the
substrates NBT/BCIP.
| | Schlagworte | | Schlagwörter Deutsch: | Mikrobiologie Saccharomyces cerevisiae Sulfit reduktive Sulfatassimilation MET3, MET14, MET16 | | Schlagwörter Englisch: | BIOLOGY, MICROBIOLOGY Saccharomyces cerevisiae sulfite sulfate assimilation MET3, MET14, MET16 | | Sonstiges | | Signatur: | D-9233 | | Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H62000 Inst.f. Angewandte Mikrobiologie (IAM) | |
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